روشن کردن مسیرهای سیگنال دهی سلولی: قدرت سنجش های گزارشگر مبتنی بر لوسیفراز
Tech Snapshot® ابزارها و فن آوری های پیشرفته امروزی را به تصویر می کشد که به اکتشافات دارویی فردا کمک می کند. این مقاله توسط BPS Bioscience، یک شرکت توسعه و تولید بیوتکنولوژی با تمرکز بر پروتئین‌های نوآورانه، آنتی‌بادی‌ها، خطوط سلولی، لنتی ویروس‌ها و کیت‌های سنجش برای تحقیقات بیودارویی و دانشگاهی نوشته شده است.
BPS Bioscience تلاش برای توسعه اکتشافات علمی جدید که منجر به درمان می شود با ایجاد راه حل های نوآورانه پایان به انتها برای تحقیق. ما با ارائه بیش از 4500 رده سلولی نوترکیب با کیفیت بالا، ابزارهای مبتنی بر ویروس، پروتئین‌ها و کیت‌هایی برای سنجش‌های بیوشیمیایی و سلولی با تمرکز بر کشف دارو، پیشرفت‌ها را در ایمونوتراپی، اپی ژنتیک، کروناویروس، سیگنال‌دهی سلولی و سایر زمینه‌های تحقیقاتی انجام می‌دهیم. یکی از زمینه‌های اصلی تخصص ما، مهندسی خطوط سلولی برای کشف دارو است، که سیستم‌های سلولی را ارائه می‌کند که غربالگری با توان بالای ترکیبات را با استفاده از خوانش‌های سلولی امکان‌پذیر می‌سازد.
سنجش‌های سلولی بخش مهمی از توسعه دارو هستند زیرا به محققان اجازه می‌دهند تا فعالیت بیولوژیکی داروهای بالقوه را بر روی سلولهای زنده ارزیابی کنند و مکانیسم اثر آنها را بهتر درک کنند. آنها برای ارزیابی مشکلات نفوذپذیری غشا و اختلالات در یک سیستم پیچیده که در سنجش های بیوشیمیایی قابل مشاهده نیستند، مورد نیاز هستند. به طور کلی، آنها نمایش دقیق تری از فعل و انفعالات پیچیده بین ترکیبات و سلول های زنده نسبت به تجزیه و تحلیل های بیوشیمیایی ارائه می دهند.
سلولهای اصلاح‌شده ژنتیکی به‌عنوان سیستم‌های مدل در کاربردهای تحقیقاتی مختلف، از جمله بیان بیش از حد پروتئین هدف یا رده‌های سلولی حذف شده، که می‌توانند برای اعتبارسنجی اهداف درمانی نامزد، ارزیابی ترکیبات جدید و رویکردهای درمانی و غیره استفاده شوند، عمل می‌کنند. برای شناسایی و مشخص کردن تأثیرگذارهای مسیرهای سیگنال دهی سلولی در زمینه سلول های سالم عملکردی، سنجش گزارشگر القایی یک گزینه ایده آل است. گزارشگران لوسیفراز در پایین دست یک عنصر پاسخ پروموتر خاص مسیر، اندازه گیری ساده، قوی و کمی فعالیت سیگنالینگ را امکان پذیر می کنند. آنها برای سنجش هم‌کشت ایده‌آل هستند زیرا وجود سلولهای مؤثر در اندازه‌گیری‌ها تداخلی ایجاد نمی‌کند.
سیستم های گزارشگر مشروط را می توان در طیف گسترده ای از انواع سلول ها و مسیرهای سیگنالینگ به کار برد و امکان غربالگری با کارایی بالا کتابخانه های ترکیبی بزرگ را برای عملکرد بازدارنده یا فعال کننده، پشتیبانی از تحقیقاتی که شامل ایمونوتراپی، ارزیابی عملکرد CAR و TCR، سنجش ADCC، مطالعات سیگنالینگ سلولی می شود، انجام داد. آزمایش‌های هم‌فرهنگ، ویرایش RNA و موارد دیگر.
برنامه های کاربردی:
- اندازه گیری فعال شدن یا مهار یک مسیر سیگنالینگ سلولی که با یک فاکتور رونویسی خاص همگرا می شود:
- آگونیست ها یا آنتاگونیست های مسیر سیگنالینگ جدید را شناسایی کنید.
- کتابخانه های ترکیبی را برای مولکول هایی که به طور انتخابی هدف مورد نظر یا مسیر بیماری را تغییر می دهند، بررسی کنید.
- مکانیسم عمل یک ترکیب کاندید را رمزگشایی کنید.
- پارامترهای موثر بر یک مسیر مورد علاقه (تحلیل تابع) را بررسی کنید.
- آزمایش‌های سمیت سلولی همزمان با کشت، مانند آن‌هایی که در توسعه ایمونوتراپی مورد استفاده قرار می‌گیرند، برای آزمایش اثربخشی یک سلول ایمنی مؤثر جدید انجام دهید.
BPS Bioscience مجموعه‌ای از رده‌های سلولی خاص مسیر را توسعه داده است، از جمله سلولهای گزارشگر که به IL-2، IL-15 و IL-6 پاسخ می‌دهند. سلول های پاسخگو به GLP-1 برای حمایت از توسعه داروهای دیابت/چاقی؛ سلول های Jurkat پاسخگو به TL1A که DDR گیرنده TL1-A را بیش از حد بیان می کنند. سلول های اولیه CAR-T که برای پشتیبانی از تست BCMA، CD20 یا CD19 طراحی شده اند. و یک خط جدید از سلول های TCR اختصاصی آنتی ژن برای نظارت بر پاسخ های ارائه آنتی ژن.
رده سلولی گزارشگر لوسیفراز حساس به TL1A Jurkat
لیگاند 1A شبه TNF (TL1A، همچنین به عنوان مهارکننده رشد اندوتلیال عروقی شناخته می شود) یک واسطه سیتوکین ضد رگ زایی التهاب است که با اتصال به گیرنده DR3 و فعال کردن سیگنال دهی پایین دست، در هموستاز ایمنی ذاتی و تطبیقی شرکت می کند. آزمایشات بالینی اخیر نوید درمان آنتی بادی ضد TL1A را برای درمان بیماری های التهابی نشان داده است.
سلول های Jurkat گزارشگر لوسیفراز DR3/NF-kB پاسخگو به TL1A، لوسیفراز کرم شب تاب را تحت کنترل عناصر پاسخ NF-kB و همچنین DR3 انسانی (گیرنده مرگ 3 یا TNFRSF25) بیان می کنند. فعال سازی مسیر سیگنالینگ NF-kB توسط TL1A را می توان با اندازه گیری فعالیت لوسیفراز کنترل کرد.
رده سلولی گزارشگر TCR (DMF4) اختصاصی MART-1 CD8+ NFAT-luciferase Jurkat
MART-1 (آنتی ژن مرتبط با ملانوما که توسط سلول های T-1 شناسایی می شود، همچنین به عنوان Melan-A شناخته می شود) یک آنتی ژن تمایزی است که بر روی سطح ملانوسیت ها بیان می شود. قطعه پپتیدی پروتئین در کمپلکس‌های MHC یافت می‌شود که توسط سلولهای T سیتوتوکسیک CD8+ شناسایی می‌شوند. MART-1 در اکثر سرطان های پوست از جمله ملانوم وجود دارد و به عنوان یک نشانگر زیستی برای اهداف تشخیصی استفاده می شود. از آنجایی که بیان پروتئین به بافت های حاوی ملانوسیت (پوست و شبکیه) محدود می شود، MART-1 یک هدف جذاب برای واکسن های سرطان و سلول درمانی سازگار است. پپتید MART-1 26-35 قطعه ای است که معمولاً با MHC مرتبط است و توسط گیرنده های سلول T شناسایی می شود.
این رده سلولی لوسیفراز کرم شب تاب را تحت کنترل عناصر پاسخ NF-kB بیان می کند. حذف TCR (گیرنده سلول T) با استفاده از ویرایش ژنوم CRISPR/Cas9 انجام شد. بنابراین، دامنه های TRAC (ثابت آلفای گیرنده سلول T) و TRBC1 (ثابت ۱ بتا گیرنده سلول T) از زنجیره های TCRα/β به طور ژنتیکی حذف شدند و سلول ها به آگونیست های CD3 پاسخ نمی دهند. سلول‌ها برای بیان بیش از حد CD8 انسانی و TCR اختصاصی MART-1 (کلون DMF4) اصلاح شدند. کلون TCR انسانی DMF4 به طور خاص آنتی ژن تومور MART-1 را تشخیص می دهد.
سلول ها با حضور پپتید MART-1 در MHC-I که توسط سلول های سرطانی یا سلول های ارائه دهنده آنتی ژن ارائه می شود، تحریک می شوند. آنها برای طراحی و بهینه‌سازی زیست‌سنجی‌های هم‌کشت مورد استفاده در پروژه‌های توسعه سلولهای TCR مفید هستند و می‌توانند به عنوان یک کنترل مثبت در آزمایش‌های ارزیابی سلولهای بیان‌کننده TCR خاص MART-1 استفاده شوند.
سلولهای گزارشگر لوسیفراز راه‌حل‌های ظریفی را برای تشخیص سریع و کمی نورتابی تقریباً هر پاسخ سلولی مورد علاقه ارائه می‌دهند، که امکان غربالگری و شناسایی ترکیبات تنظیم‌کننده مسیرهای سیگنالینگ، مطالعه عملکردهای بیولوژیکی یا شناسایی بازیگران کلیدی در یک مسیر را فراهم می‌کند. مجموعه ما حوزه های تحقیقاتی مختلفی از جمله سرطان، بیماری های عصبی، دیابت و اختلالات متابولیک و همچنین بیماری های قلبی عروقی را پوشش می دهد. علاوه بر این، سلول های گزارشگر برای کمک به توسعه درمان های سلولی سازگار و بهینه سازی بیولوژیک های مبتنی بر آنتی بادی در دسترس هستند. مجموعه ای از محصولات پشتیبانی، از جمله محیط کشت سلولی بهینه و سیستم بسیار ساده ONE-Step™ Luciferase Assay، برای ساده سازی پروژه های شما طراحی شده است.
درباره گزینه های خرید خط سلول BPS Bioscience و شرایط صدور مجوز ما بیشتر بیاموزید صفحه خطوط سلولی.
